Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型冠心病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到去甲自身抗本体到注意到1标准型癌症诊断病征的实质性率在儿童时期就有很好的刻画，多个去甲自身抗本体HIV的儿童之记事70%在血清转换后10年中患有癌症，而随访15年的儿童这一人口比例减少到84%。相较来说之下，占诊断1标准型癌症一半以上的标准型1标准型癌症的胃癌程序还没有受益充分的研究工作。

越来越多的人开始用作已确定遏制系统来定义1标准型癌症的实质性：个本体在注意到多种去甲自身抗本体时进入第1收尾，注意到胰岛素异常时进入第2收尾，注意到病征时进入第3收尾。一些多发去甲自身抗本体HIV的个本体，在1期和2期，实质性较更慢，并持续发展为胃癌的1标准型癌症。我们以前刻画了一四组在首次测定到多种去甲自身抗本体抽取后最少10年无癌症的极更慢实质性者，这四组病症人数少，但特征相当指明。随后，我们发现去甲自身抗原抗原CD8+T细胞内化学反应在实质性极快的病症之中必需不存有，但在近期胃癌和长期存有的癌症病症之中很容易测定到。这可能会说明了，与实质性病症相较来说，这些病症自身免疫化学反应的恒定增强。

早期研究工作说明了，尽管恒定性T细胞内(Treg)数量正常，但癌症病症存有一些机制瑕疵，其之中都有对IL-2的化学反应能力也降低。此外，癌症病症之中的现像CD4+T细胞内可能会对恒定更为重要抵抗性，观感为现像T细胞内的诱发减弱，自然产生的Treg和本人体内产生的抑制Treg，以及抗原境况的CD4+T细胞内之中IL-2化学反应减弱。本研究工作的借此是刻画了CD4+恒定性T细胞内(Treg)在一小群极极快实质性者之中的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

分析方法：BOX研究工作是一项以人群辅以的侧向研究工作，在21岁请注意确诊的病症亲属之中检查1标准型癌症的脆弱因素。我们以前刻画了长期极快实质性者的特征，他们保持稳定多重去甲自身抗本体HIV少于10年，但没有注意到癌症的诊断病征，更慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名继续保持稳定无癌症并情愿透过大量肠道抽取的极快实质性者纳入T和B细胞内机制比对。在目前的研究工作之中，8名更慢实质性者(SP四组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的去甲自身抗本体HIV。所有的发起者都所处1标准型癌症实质性的1期，尽管一些人随后丧失了去甲自身抗本体对某些抗原的施打，然而，一名病症已经所处2期最少6年，但没有注意到诊断病征，一名病症被诊断为癌症，该受测者72岁，在挖掘实验抽取时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据比对之中对该ADP顺利进行了单独评估。分开外周血单个核细胞内(PBMCs)，有别于多表达式流式细胞内术和T细胞内诱发实验评估ADP之中Treg的基频、基因标准型和机制。用作FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和回归)顺利进行无都由聚类比对，评估Treg基因标准型。

结果：与有益ADP相较来说，来自更慢实质性本体的清醒CD4+T细胞内的都由聚类揭示，激活的清醒CD4+ Treg基频减少，与止痛药抑制的TNFR相关受体(GITR)解读减少有关。一名HbA1c急剧下降的病症与实质性极快者和最简单的解读四组相较来说，Treg谱大致相同。机制比对说明了，与有益ADP相较来说，来自极快实质性本体的Treg抑制的CD4+现像T细胞内诱发明显毁坏。观感为对现像CD4+T细胞内CD25和CD134解读的诱发减少。

三幅1 深入的基因标准型比对揭示，CD4+Treg亚标准型在更慢实质性缓冲区之中减少。由FlowSOM作用于的Treg过道，聚集在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标有物解读比对出10个元簇:清醒T细胞内_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞内;HLA-DR + GITR +清醒T细胞内;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)用作9个不同Treg标有作用于的10个元簇的MST。每个节点都有一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在节点四组周围上色。每个节点之中的饼三幅暗示单个标有的解读层次。(b)每个元聚类的热三幅，以揭示整本体标有解读。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)作用于三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的大块。(e-l)相较同位素为每个metacluster罐终点站三幅(同位素> 0.05%)确定为HD和SP四组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞内(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞内(l)。浅蓝色红色都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用作CITRUS的预测模标准型证实，Treg基频的减少是实质性极快的标志。国际标准去极化(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP发起者和最简单的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞内上的关联性。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的民族特色三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利进行分开，仿真FlowSOM群本体。(b) HD(黑点)和SP(星点)四组以及ADPSP 606(浅蓝色)之中CD25+ cd127的基频简介三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去极化三偏序的罐终点站三幅;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)木瓜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读风力制做，标记厚实的簇被识别为SP和HD缓冲区相互间的不同。(j)罐终点站三幅揭示了在SP(星点)和HD(灰点)四组之中，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相较同位素(人口比例)。(k)直方三幅揭示每个簇的基因标准型(黑色)和Treg标有相较解读与背景解读(深蓝色);上列，内核Treg_3;示意图一路上，内核Treg_4。背景与所有其他簇之中标有的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与有益献血者相较来说，实质性极快者清醒treg的GITR减少。每个清醒CD4+T细胞内元簇(清醒T细胞内_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞内;HLA-DR + GITR +清醒T细胞内;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个解读标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的解读热三幅(sp606不都有在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR解读串联，揭示直方三幅(c)和简介三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有ADP都有，p< 0.05(深蓝色)ADPSP 606和最简单的HD不都有在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR解读，从国际标准去极化，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(浅蓝色)串联，揭示直方三幅(e)和简介三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自极快实质性的CD4+ treg细胞内遏制现像CD4+T细胞内的能力也降低。SP四组用深蓝色的终点站和红色暗示，HD四组用黑色的终点站和红色暗示，浅蓝色的终点站/红色暗示ADPsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(转发者)被标有为CFSE, Treg按注意到的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞内，培育3几天后顺利进行流式细胞内术测定。(a-d)与CD4+转发者相较应的treg培育(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培育。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱发一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发一般而言。用作HIV解读(激活的自发细胞内不含treg)近似值诱发一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 现像CD4+T细胞内对极快实质性的T细胞内再生的诱发更引人注目。SP四组用深蓝色的终点站和红色暗示，HD四组用黑色的终点站和红色暗示，浅蓝色的终点站/红色暗示ADPsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标有，treg按注意到的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞内，培育3几天后顺利进行流式细胞内术(CD25反染)和细胞内因三子比对。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培育。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱发前年(b)。(c,d) CD25诱发前年(c)和CD134诱发前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育之中的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们近似值出来的论证是，来自极快实质性三子的再生清醒CD4+Treg在GITR解读之中受益了扩展和多样化，强调了进一步研究工作Treg在1标准型癌症后果个本体之中的异质性的不足之处。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28