Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型乳癌患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现借助于来肾脏自身突变到显现借助于来1标准型冠心病诊断疼痛的令人满意率在孩童时期就有很好的刻画，多个肾脏自身突变阴性的孩童中所有70%在血清转换后10年内患上冠心病，而随访15年的孩童这一百分比提高到84%。相较之下，%诊断1标准型冠心病一半以上的标准型1标准型冠心病的发病机制还没有得到确实的研究工作。

越来越多的人开始用于不应于系统来定义1标准型冠心病的令人满意：变异在显现借助于来多种肾脏自身突变时转至第1先决条件，显现借助于来血糖反常时转至第2先决条件，显现借助于来疼痛时转至第3先决条件。一些多发肾脏自身突变阴性的变异，在1期和2期，令人满意较更慢，并发展为发病的1标准型冠心病。我们以前刻画了一第一组在首次检查到多种肾脏自身突变试样后至不及10年无冠心病的极更慢令人满意者，这第一组患儿人口数不及，但相似性极为具体。随后，我们发现肾脏自身蛋白突变CD8+T直通粒体反不应会在令人满意加速的患儿中所大体不存有，但在近来发病和近十年存有的冠心病患儿中所很容易检查到。这意味著说明了，与令人满意患儿相较，这些患儿自身突变的缓冲大幅提高。

后期研究工作说明了，尽管缓冲性T直通粒体(Treg)比例正常，但冠心病患儿存有一些机制缺陷，其中所包括对IL-2的反不应会管控能力增大。此外，冠心病患儿中所的现象CD4+T直通粒体意味著对缓冲极为具抵抗性，展现出为现象T直通粒体的抑制作用减更慢，自然产生的Treg和粘液产生的游离Treg，以及蛋白境况的CD4+T直通粒体中所IL-2反不应会减更慢。本研究工作的目的是刻画了CD4+缓冲性T直通粒体(Treg)在一小群极加速令人满意者中所的相似性，他们的平均同期为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

作法：BOX研究工作是一项以青年人基础上的交叉研究工作，在21岁以下确诊的患儿亲族中所检查1标准型冠心病的危险主因。我们以前刻画了近十年加速令人满意者的相似性，他们保持多重肾脏自身突变阴性超过10年，但没有显现借助于来冠心病的诊断疼痛，更慢性或非来进行性自身免疫。随后，10名暂时保持无冠心病并愿意透过大量肝脏试样的加速令人满意者纳入T和B直通粒体机制系统性。在目前的研究工作中所，8名更慢令人满意者(SP第一组)，中所位同期43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的肾脏自身突变阴性。所有的发起者都正处于1标准型冠心病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身突变对某些蛋白的阴性反不应会，然而，一名患儿已经正处于2期至不及6年，但没有显现借助于来诊断疼痛，一名患儿被诊断为冠心病，该受试者72岁，在收集实验试样时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在统计学中所对该NADPH来进行了单独评核。剥离外周血单个核直通粒体(PBMCs)，采行多变量流式直通粒体拳法和T直通粒体抑制作用试验评核NADPH中所Treg的基频、表标准型和机制。用于FlowSOM和CITRUS(聚类认定、表征和重回)来进行无监督聚类系统性，评核Treg表标准型。

结果：与身心健康NADPH相较，来自更慢令人满意体的清醒CD4+T直通粒体的监督聚类辨识，激已逝的清醒CD4+ Treg基频提高，与免疫抑制游离的TNFR关的蛋白(GITR)突显提高有关。一名HbA1c增大的患儿与令人满意加速者和匹配的对照第一组相较，Treg谱有所有所不同。机制系统性说明了，与身心健康NADPH相较，来自加速令人满意体的Treg细胞内的CD4+现象T直通粒体抑制作用微小受损。展现出为对现象CD4+T直通粒体CD25和CD134突显的抑制作用提高。

上图1 深入的表标准型系统性辨识，CD4+Treg亚标准型在更慢令人满意字段中所提高。由FlowSOM转化的Treg室，聚集在来自所有NADPH的已逝CD4+CD45RA -直通粒体上。根据标有物突显认定借助于10个元簇:清醒T直通粒体_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T直通粒体;HLA-DR + GITR +清醒T直通粒体;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用于9个有所不同Treg标有转化的10个元簇的MST。每个路由代表一个集群(100个集群)，极为大的元集群(10个元集群)在路由第一组区域内上色。每个路由中所的饼上图对此单个标有的突显行政级别。(b)每个元聚类的热上图，以辨识整体标有突显。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)转化上图，以及FlowSOM辨识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较核素为每个metacluster装直通上图(核素> 0.05%)确定为HD和SP第一组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T直通粒体(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T直通粒体(l)。紫色白点代表人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核查。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 用于CITRUS的预测模标准型证实，Treg基频的提高是令人满意加速的标志。AO暂时性(a - f)和柑橘系统性(g-k)比较SP发起者和匹配的HD发起者在CD4+CD45RA−T直通粒体上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个体的代表性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR突显来进行剥离，实时FlowSOM个体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第一组以及NADPHSP 606(紫色)中所CD25+ cd127的基频概要上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性空集的装直通上图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)木瓜簇球状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3突显强度着色，斜线突借助于的簇被辨识为SP和HD字段间的有所不同。(j)装直通上图辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)第一组中所，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相较核素(百分比)。(k)直方上图辨识每个簇的表标准型(粉色)和Treg标有相较突显与背景突显(浅蓝色);上列，磁盘Treg_3;下面四人，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇中所标有的突显有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩核查

上图3 与身心健康献血者相较，令人满意加速者清醒treg的GITR提高。每个清醒CD4+T直通粒体元簇(清醒T直通粒体_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T直通粒体;HLA-DR + GITR +清醒T直通粒体;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个突显标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的突显热上图(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中所所有HD(白色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR突显串接，辨识直方上图(c)和概要上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和核查，p< 0.07(紫色)所有NADPH包括，p< 0.05(浅蓝色)NADPHSP 606和匹配的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR突显，从AO暂时性，从所有HD(白色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(紫色)串接，辨识直方上图(e)和概要上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩核查

上图4 来自加速令人满意的CD4+ treg直通粒体管控现象CD4+T直通粒体的管控能力增大。SP第一组用浅蓝色的直通和白点对此，HD第一组用黑色的直通和白点对此，紫色的直通/白点对此NADPHsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T直通粒体来进行分选。CD4+CD25−(此番者)被标有为CFSE, Treg按判读的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠转化直通粒体，培养3天后来进行流式直通粒体拳法检查。(a-d)与CD4+此番者相较不应的treg培养(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培养。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE抑制作用比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用比率。用于阴性对照(激已逝的响不应直通粒体含treg)数值抑制作用比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 现象CD4+T直通粒体对加速令人满意的T直通粒体转化的抑制作用极为敏感。SP第一组用浅蓝色的直通和白点对此，HD第一组用黑色的直通和白点对此，紫色的直通/白点对此NADPHsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T直通粒体来进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标有，treg按判读的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠转化直通粒体，培养3天后来进行流式直通粒体拳法(CD25反染)和直通粒体因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培养。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE抑制作用百分率(b)。(c,d) CD25抑制作用百分率(c)和CD134抑制作用百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在上海交通大学中所的突显。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们得借助于的论点是，来自加速令人满意子的转化清醒CD4+Treg在GITR突显中所得到了拓展和充沛，突显了有利于研究工作Treg在1标准型冠心病可能性变异中所的系统性的必要性。

原文说是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28